Cryptosporidium i wodnopochodna kryptosporydioza: nowoczesne metody wykrywania, identyfikacji i oceny zagrożenia epidemiologicznego. Zabrze

Monografia autorstwa dra Michała Polusa porusza istotne zagadnienie detekcji pierwotniaków rodzaju Cryptosporidium w wodzie i ściekach. W książce szeroko omówiono występowanie oocyst tych pierwotniaków w środowisku, ich taksonomię i czynniki sprzyjające inaktywacji, rozwój pierwotniaków z oocyst w organizmach żywych, drogi zakażenia, objawy kliniczne choroby, objawowe metody leczenia, wpływ procesów uzdatniania wody i oczyszczania ścieków na zagrożenie społeczne kryptosporydiozą, przypadki epidemii, a przede wszystkim metody wykrywania oocyst w wodzie i ściekach. Książka Cryptosporidium i wodnopochodna kryptosporydioza: nowoczesne metody wykrywania, identyfikacji i oceny zagrożenia epidemiologicznego to bogato ilustrowane źródło wiedzy na temat pierwotniaka występującego powszechnie we wszystkich krajach świata, także w Europie i wywołującego pospolite objawy chorobowe, przez co często jest on niewykrywany. Nowatorska koncepcja autora opierająca się na bardzo dokładnych badaniach laboratoryjnych, pozwoliła na wypracowanie protokołu postępowania o dużej czułości, co może mieć realny wpływ na regulacje prawne w zakresie postępowania diagnostyczno-epidemiologicznego, szczególnie w monitorowaniu wody. Spis treści Wykaz stosowanych skrótów 1. Wprowadzenie 2. Rodzaj Cryptosporidium 2.1. Taksonomia 2.2. Genetyka 2.3. Cykl życiowy 2.4. Właściwości oocyst 2.4.1. Wpływ czynników fizycznych na przeżywalność oocyst 2.4.2. Wpływ czynników chemicznych na przeżywalność oocyst 2.4.3. Wpływ czynników biotycznych na przeżywalność oocyst 2.5. Występowanie i rozpowszechnienie 2.5.1. Występowanie u ludzi 2.5.2. Występowanie u zwierząt 2.5.2.1. Ssaki 2.5.2.2. Ptaki 2.5.2.3. Ryby, gady i płazy 2.6. Transmisja 2.6.1. Transmisja bezpośrednia 2.6.2. Transmisja wodnopochodna 2.6.2.1. Woda do picia 2.6.2.2. Rekreacja wodna 2.6.3. Transmisja przez żywność 2.6.4. Transmisja przez wektory 3. Wodnopochodna kryptosporydioza 3.1. Obraz kliniczny 3.2. Odpowiedź immunologiczna 3.2.1. Odporność nieswoista 3.2.2. Odporność adaptacyjna 3.3. Terapia 3.3.1. Nitazoksanid 3.3.2. Paromomycyna 3.3.3. Makrolidy 3.3.4. Pochodne ryfamycyny 3.3.5. Inne substancje czynne 3.3.6. Nowe kierunki terapeutyczne 3.3.7. Szczepionki 3.4. Epidemiologia i zdrowie publiczne 3.4.1. Zakaźność 3.4.2. Chorobowość 3.4.3. Śmiertelność 3.5. Diagnostyka laboratoryjna 3.5.1. Przygotowanie materiału 3.5.2. Barwienie 3.5.3. Immunochemia 3.5.4. Inne rozwiązania diagnostyczne 3.6. Transmisja wodnopochodna 3.6.1. Woda do picia 3.6.2. Rekreacja wodna 3.6.3. Uzdatnianie wody 3.6.3.1. Filtracja 3.6.3.2. Dezynfekcja chemiczna 3.6.3.3. Dezynfekcja fizyczna 3.6.3.4. Ocena skuteczności dezynfekcji 3.6.4. Oczyszczanie ścieków 3.6.4.1. Ścieki komunalne i gospodarczo-bytowe 3.6.4.2. Ścieki i odpady rolnicze 4. Detekcja Cryptosporidium w wodzie 4.1. Zalecenia i wytyczne 4.1.1. Wielka Brytania 4.1.2. Stany Zjednoczone 4.1.3. Polska 4.2. Zarys metodyki 4.2.1. Pobór i zagęszczanie próbki 4.2.2. Oczyszczanie oocyst 4.2.3. Detekcja 4.3. Metody referencyjne 4.3.1. US EPA 1622/1623 – USA 4.3.2. Standard Operating Protocol – Wielka Brytania 4.3.3. ISO 15553:2006 4.4. Metody alternatywne 4.4.1. FISH 4.4.2. Testy ekscystacji 4.4.3. Hodowle komórkowe 4.4.4. Biotesty 4.5. Metody molekularne 4.5.1. Zarys procedury 4.5.2. Ekstrakcja DNA 4.5.3. Loci targetowe i konstrukcja starterów 4.5.4. PCR i analiza produktów 4.5.5. Analiza ilościowa 4.6. Podsumowanie obecnego stanu wiedzy 5. Część eksperymentalna 5.1. Cel badań 5.2. Przedmiot badań 5.3. Materiały 5.4. Metody 5.4.1. Zagęszczanie próbek wody i ścieków 5.4.2. Oczyszczanie zagęszczonych próbek wody i ścieków 5.4.3. Izolacja DNA z wody 5.4.3.1. Użycie detergentów 5.4.3.2. Użycie soli chaotropowych 5.4.3.3. Użycie uniwersalnych zestawów komercyjnych 5.4.4. Izolacja DNA ze ścieków komunalnych 5.4.5. PCR 5.4.5.1. Startery 5.4.5.2. Warunki reakcji 5.4.5.3. Kontrola czułości PCR 5.4.6. RFLP-PCR 5.4.7. Multipleks-PCR 5.4.8. RT-PCR 5.4.8.1. Izolacja RNA z wody 5.4.8.2. Izolacja RNA ze ścieków komunalnych 5.4.8.3. Warunki reakcji 5.4.8.4. Multipleks RT-PCR 5.4.9. Protokół badań 5.5. Wyniki 5.5.1. Wyniki badań wstępnych 5.5.2. Wody powierzchniowe 5.5.3. Kryte baseny 5.5.4. Ścieki komunalne 5.6. Dyskusja 6. Wnioski końcowe 7. Literatura 8. Streszczenie 9.Summary